Анотація до роботи:

Терпяча І.В. Зберігання сперміїв в умовах гіпотермії для використання в програмі екстракорпорального запліднення ооцитів людини. - Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата біологічних наук за спеціальністю 03.00.19 – кріобіологія. Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України, Харків, 2004.

Дисертаційна робота присвячена вивченню дії гіпотермічних умов зберігання на морфофункціональні характеристики сперміїв людини. Для вирішення поставлених у роботі задач було досліджено вплив різних середовищ, температурних умов та термінів зберігання на кінетичну активність, життєздатність та активність акрозину сперміїв активнорухливої фракції, виділенних із еякуляту людини, і показано, що найкраще ці показники зберігаються при температурі 8⁰С у середовищі Menezo B2 протягом 24 годин. У роботі було доведено, що спермії, які перебували в умовах гіпотермії, зберігають свою запліднюючу здатність. Була розроблена й апробована методологія використання цих сперміїв для запліднення первісно незрілих ооцитів після їх дозрівання та реінсемінації яйцеклітин, що не запліднилися, при лікуванні безплідності методом екстракорпорального запліднення.

1. У дисертаційній роботі представлено теоретичне, експериментальне узагальнення та нові рішення наукової проблеми, що стосується вивчення властивостей активнорухливої фракції сперміїв в різних умовах гіпотермічного зберігання та її застосування для інсемінації ооцитів після дозрівання і реінсемінації незапліднених ооцитів людини.

2. Спермії, що були виділені із еякулятів з астеноспермією з застосуванням середовища Menezo B2 або середовища на основі Ham F-10, мали вихідні морфологічні і функціональні показники на 22 % вищі, ніж при застосуванні середовища на основі розчину Хенкса; після гіпотермічних умов зберігання протягом 24 годин композиційний вміст середовищ Menezo B2 і Ham F-10 не впливав на показники збереження кінетичної активності сперміїв, в той час як у середовищі на основі розчину Хенкса цей показник був у 7,6 разів нижчим.

3. Концентрація гамет зі швидким прогресивним рухом після гіпотермічних умов зберігання (8⁰С) залежала від такого показника у вихідних еякулятах з астеноспермією. У групах з нормо- (I) та помірною астеноспермією (II) після 24 годин зберігання концентрація сперміїв залишалася нарівні з контролем, після чого кількість гамет зі швидким прогресивним рухом зменшувалася, відповідно, на 41 % і 50 %. Через 72 години активнорухливих гамет у зразках I групи було на 7 % більше, ніж в зразках II групи. Концентрація гамет зі швидким прогресивним рухом у групі зі значною астеноспермією (III) через 48 годин складала тільки 16,5 % від вихідних.

4. Активність акрозину у досліджених зразках сперміїв залежала від температурних умов її зберігання (37⁰С;22⁰С; 4⁰С; 8⁰С); тільки при температурі 8⁰С через 24 години активність ферменту не відрізнялась від вихідних показників; визначення активності акрозину є більш чутливим показником функціонального стану сперміїв в умовах дії температурних факторів, ніж їх кінетична активність.

5. Розроблена і апробована методологія застосування сперміїв, що зберігались в гіпотермічних умовах, для запліднення незрілих ооцитів; поетапна інсемінація ооцитів, що знаходились на дозріванні, дає можливість збільшити кількість ембріонів для переносу пацієнтці і підвищити частоту настання вагітності в програмі екстракорпорального запліднення.

6. Ефективність програми ЕКЗ можна покращити за рахунок збільшення кількості запліднених яйцеклітин, застосовуючи реінсемінацію ооцитів, що не запліднились, сперміями, які зберігались при 8⁰С. При цьому частота хромосомних порушень в ембріонах, отриманих після реінсемінації ооцитів такими сперміями, не перевищує аналогічного показника при використанні нативних гамет.

7. Розроблена методологія зберігання активнорухливої фракції сперміїв в умовах гіпотермічних температур може бути використана для короткочасного зберігання чоловічих гамет у програмах допоміжних репродуктивних технологій.

Публікації автора:

1. Использование спермиев, хранившихся в условиях гипотермии для реинсеминации неоплодотворенных ооцитов в программе ЭКО // Проблемы криобиологии. – 1998. - № 3. – С. 48-52 (співав.: Грищенко В.І., Піняєв В.І., Петрушко М.П., Луцька Л.І., Крамар М.Й., Юрченко Г.Г.; дисертантом було зроблено літературний пошук щодо реінсемінації ооцитів, проведено виділення ооцитів з фолікулярної рідини, оцінку їх якості, розроблено методику реінсемінації ооцитів, що не запліднилися, сперміями, які зберігалися в умовах гіпотермії).

2. Морфофункциональные характеристики спермиев человека, хранившихся при низких положительных температурах // Проблемы криобиологии. - 1998. - № 4. – С. 63-64 (співав.: Грищенко В.І., Чуб Н.Н., Крамар М.Й., Черепанова Т.А., Кучков І.М.; дисертантом було проведено виділення активнорухливої фракції з еякуляту, її зберігання в умовах гіпотермії, дослідження активності ферменту акрозину в сперміях до і після зберігання, узагальнення отриманих результатів).

3. Application of sperm stored under hypotermia conditions for reinsemination of non-fertilized oocytes under extracorporal fertilization program // Journal of Assisted Reproduction and Genetics. – 1999. - Vol. 16, № 3. - P. 150 (співав.: Грищенко В.І., Піняєв В.І., Петрушко М.П., Луцька Л.І.; дисертантом було зроблено літературний пошук щодо реінсемінації ооцитів, проведено виділення ооцитів з фолікулярної рідини, оцінку їх якості, розроблено методику реінсемінації ооцитів, що не запліднилися, сперміями, які зберігалися в умовах гіпотермії).

4. Беременность и роды после переноса деконсервированных эмбрионов // Проблемы криобиологии. – 2003. - № 3. – С. 99-102 (співавтор.: Петрушко М.П., Геродес Г.Г.; дисертантом було проведене виділення ооцитів з фолікулярної рідини, попередня інкубація ооцитів до інсемінації, виділення активнорухливої фракції сперміїв, інсемінацію, аналіз отриманих ембріонів).

5. Повышение результативности программы ЭКО путем поэтапной инсеминации ооцитов разной степени зрелости спермиями, хранившимися в условиях гипотермии // Медицина сегодня и завтра. – 2004. - №1.- С. 173-176 (співавтор.: Геродес Г.Г., Луцька Л.І.; дисертантом було проведено літературний пошук щодо дозрівання ооцитів різного ступеню зрілості, виділення ооцитів з фолікулярної рідини, оцінку їх якості, проведено серію експериментів щодо інсемінації незрілих ооцитів сперміями, які зберігалися в умовах гіпотермії).

6. Possibilities of using spermatozoa stored under hypothermia conditions for in vitro fertilization // Comptes rendus de L’Academie Bulgare des Sciences. – 1994. - Vol. 47, № 10. - P. 109-110 (співав.: Чуб Н.Н., Тодоров П.Т., Піняєв В.І.; дисертантом було проведено: зберігання сперміїв в умовах гіпотермії та запліднення ооцитів).

7. Изучение пенетрационной и оплодотворяющей способности спермиев человека, хранившихся в условиях гипотермии // Бесплодие: Вспомогательные репродуктивные технологии. – К.: Ин-т репродуктивной медицины УАННП. – 1995. – 166 с. (співавтор.: Чуб Н.Н., Піняєв В.І., Луцька Л.І.; дисертантом було проведене зберігання сперміїв в умовах гіпотермії, оцінка кінетичної активності сперматозоїдів до і після зберігання, інсемінацію ооцитів сперміями, що зберігалися в умовах гіпотермії, узагальнення і аналіз отриманих результатів).

8. Morfological and functional integrity of human embryo and sperm after storage // Proc. 31^st Annual Meeting Society for cryobiology. - Kyoto (Japan). – 1994. - P. 103 (співавтор.: Грищенко В.І., Чуб Н.Н., Піняєв В.І., Юрченко Г.Г., Крамар М.Й., Чадаєв В.Е., Луцька Л.І.; дисертантом було проведене зберігання сперміїв в умовах гіпотермії, оцінка кінетичної активності сперматозоїдів до і після зберігання, узагальнення отриманих результатів).

9. Morphofunctional, суtоgеnеtіс characteristics of gametes, zygotes and embryos after exposure to hypothermia // Proc. The Society for cryobiology “Cryo 95”. - Madison (Wisconsin).- 1995. - № 2-52 (співавтор.: Грищенко В.І., Чуб Н.Н., Піняєв В.І., Юрченко Г.Г., Крамар М.Й., Петрушко М.П.; дисертантом було проведене зберігання сперміїв в умовах гіпотермії, оцінка кінетичної активності сперматозоїдів до і після зберігання, узагальнення отриманих результатів).

10. Способность сперматозоидов, хранившихся при гипотермии, к оплодотворению in vitro // Труды 1 съезда украинского общества криобиологии и криомедицины. - Харьков: Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины. - 1995. - С. 275-276 (співавтор.: Чуб Н.Н., Геродес Г.Г., Піняєв В.І.; дисертантом було проведене зберігання сперміїв в умовах гіпотермії, оцінка кінетичної активності сперматозоїдів до і після зберігання, інсемінація ооцитів сперміями, що зберігалися в умовах гіпотермії, узагальнення і аналіз отриманих результатів).