Анотація до роботи:

Грищенко М.Г. Вміст біологічно-активних речовин у фолікулярній рідині та їх вплив на процеси запліднення ооцитів і розвиток ембріонів in vitrо при безплідності. - Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата медичних наук за спеціальністю 14.01.01 – акушерство та гінекологія. Харківський державний медичний університет МОЗ України, Харків, 2002.

Дисертаційна робота присвячена вивченню обміну простагландинів, стану процесів перекисного окислення ліпідів (ПОЛ) і антиоксидантних ферментних систем у фолікулярній рідині (ФР) у фізіологічних менструальних циклах і при лікуванні безплідності в програмі запліднення in vitro (ЗІВ). Проведено комплексне дослідження, що включало визначення в ФР концентрації простагландинів E₂ і F_2a, вмісту продуктів перекисного окислення ліпідів, активності антиоксидантных ферментних систем у фізіологічних циклах і в програмі ЗІВ. Для вирішення поставлених в роботі задач було обстежено 210 пацієнтів. Обстежили 90 подружніх пар, що звернулися для лікування безплідності і були включені в програму ЗІВ. Контрольну групу (n=30) складали пацієнтки в фізіологічних циклах, яким у плановому порядку було показано оперативне лікування з приводу захворювань, не пов'язаних з патологічними змінами тканини яєчників.

У результаті досліджень виявлено, що в ФР, отриманій в програмі ЗІВ, інтенсивність процесів ПОЛ і синтезу Pg F_2a значно перевищує відповідні показники в зразках пацієнток у фізіологічних циклах, що свідчить про вихід цих процесів у преовуляторному фолікулі при стимуляції суперовуляції за фізіологічні межі. Ці дані вказують на підвищену небезпеку впливу реактивних кисневих сполук на ооцити при лікуванні безплідності в програмі ЗІВ

При аналізі результатів визначення концентрації продуктів ПОЛ і активності антиоксидантных ферментних систем у циклах ЗІВ із різним відсотком запліднення ооцитів in vitro виявлено збільшення інтенсивності процесів ПОЛ і одночасна неспроможність антиоксидантных систем у випадках з незадовільними результатами лікування. В ряді спостережень отримані результати дозволили уяснити причини неефективного лікування в програмі ЗІВ. Виявлено певний зв'язок між співвідношенням Pg E₂/F_2a і темпами дроблення ембріонів in vitro. Вперше виявлена залежність між активністю антиоксидантного ферменту супероксиддисмутазы у ФР і морфологією ооцитів, отриманих у результаті стимуляції суперовуляції, темпами дроблення і морфологією ембріонів у програмі ЗІВ.

На підставі отриманих даних удосконалена система обстеження подружніх пар у програмі ЗІВ, визначені оптимальні показники концентрації простагландинів E₂ і F_2a у ФР, розроблені критерії прогнозування результатів ембріологічного етапу програми ЗІВ.

З метою підвищення ефективності лікування безплідності методом запліднення in vitro було проведене комплексне біохімічне дослідження фолікулярної рідини людини після стимуляції овуляції та в фізіологічних циклах, що дозволило уточнити деякі важливі аспекти, які впливають на результати лікування безплідності в програмі ЗІВ, і розробити ряд прогностичних критеріїв.

1. Встановлено, що в фолікулярній рідині, отриманій в програмі ЗІВ, інтенсивність процесів перекисного окислення ліпідів і синтезу Pg F_2a значно перевищує відповідні показники у фолікулярній рідині пацієнток у фізіологічних циклах, що свідчить про вихід цих процесів у преовуляторному фолікулі при стимуляції суперовуляції за фізіологічні межі. Ці дані вказують на підвищену небезпеку впливу реактивних кисневих сполук на ооцити при лікуванні безплідності в програмі ЗІВ.

2. При зіставленні результатів виміру у фолікулярній рідині концентрації простагландинів, продуктів перекисного окислення ліпідів та активності антиоксидантних ферментних систем у стимульованих циклах встановлено, що вибір схеми стимуляції суперовуляції не впливає на досліджені показники.

3. Виявлено достовірний взаємозв'язок між станом процесів перекисного окислення ліпідів у фолікулярній рідині і здатністю ооцитів до запліднення in vitro. Підвищення інтенсивності процесів перекисного окислення ліпідів у фолікулярній рідині негативно впливає на морфологічні й, у великій мірі, функціональні характеристики ооцитів, що проявляється в тенденції до збільшення кількості клітин з ознаками деградації, а також у достовірному зниженні їх здатності до запліднення, погіршенні морфологічних властивостей ембріонів.

4. Підвищення інтенсивності процесів перекисного окислення ліпідів у фолікулярній рідині найбільш виражене в групах з найменшим відсотком запліднення ооцитів і з більшою фрагментацією ембріонів. Про це свідчить підвищений вміст продуктів перекисного окислення ліпідів (малонового діальдегіду і дієнових кон'югатів) у фолікулярній рідині.

5. У фолікулярній рідині при підвищенні інтенсивності процесів перекисного окислення ліпідів відзначається достовірне збільшення концентрації відновленого глутатіона і супероксиддисмутазної активності. Збільшення активності супероксиддисмутази в 3,8 рази у групі з найменшим відсотком запліднення свідчить про значення супероксидного радикала, як найбільш небезпечної реактивної кисневої сполуки у фолікулярній рідині.

6. Достовірних змін активності глутатіонпероксидази, глутатіонтрансферази і каталази у фолікулярній рідині в зв'язку зі змінами інтенсивності процесів перекисного окислення ліпідів не виявлено.

7. Збільшення інтенсивності перекисного окислення ліпідів значною мірою впливає на обмін простагландинів у фолікулярній рідині. Надмірний вплив реактивних кисневих сполук приводить до зміни концентрації простагландинів у фолікулярній рідині – зростає концентрація Pg F_2a при відносному зниженні концентрації Pg E₂. У більшому ступені змінюється співвідношення Pg E₂/F_2a ;

8. Запропонований комплекс біохімічних досліджень, що включає визначення інтенсивності процесів перекисного окислення ліпідів, активності супероксиддисмутази, концентрації відновленого глутатіона і співвідношення Pg E₂/F_2a у фолікулярній рідині, може бути використаний при застосуванні допоміжних репродуктивних технологій для прогнозування здатності ооцитів до запліднення і вірогідності розвитку повноцінних ембріонів.

Публікації автора:

1. Использование фолликулярной жидкости человека на этапе культивирования гамет и эмбрионов в программе ЭКО // Проблемы репродукции. – М., – 1999. – № 6. - С. 43-47 (співавт.: Грищенко В.И., Геродес А.Г., Петрушко М.П., Пиняев В.И.; огляд літературних джерел).

2. Влияние интенсивности процессов перекисного окисления липидов в фолликулярной жидкости человека на оплодотворение ооцитов и развитие эмбрионов при лечении бесплодия методом оплодотворения in vitro // Медицина сьогодні і завтра. – Харків, – 2000. – № 1. - С. 102 – 104 (співавт.: Рязанцев В.В.; збір матеріалу та його аналіз, огляд літературних джерел, підготовка до друку).

3. Роль антиоксидантных ферментных систем фолликулярной жидкости в процессах оплодотворения ооцитов при лечении бесплодия с использованием вспомогательных репродуктивных технологий // Медицина сьогодні і завтра. – Харків, – 2001. – № 3. - С. 102 – 104 (співавт.: Петрушко М.П., Піняєв В.И., Рязанцев В.В.; збір матеріалу, огляд літературних джерел, статистична обробка, підготовка до друку).

4. Процеси перекисного окислення ліпідів, антиоксидантні ферментні системи фолікулярної рідини та процеси запліднення ооцитів in vitro при використанні допоміжних репродуктивних технологій // Педіатрія акушерство та гінекологія. – 2002. – № 2. – С. 104-107 (співавт.: Петрушко М.П., Піняєв В.И., Рязанцев В.В.; огляд літератури, збір та аналіз матеріалу, підготовка до друку).

5. Патент 48932А Україна, МПК 7, G01N33/00. Спосіб прогнозування запліднення ооцитів при лікуванні безплідності в програмі запліднення in vitro / (Україна). – № 2002075610; Заявлено 08.07.2002; Опубл. 15.08.2002, Бюл.№8. (співавт.: Петрушко М.П., Піняєв В.И., Рязанцев В.В.; огляд літератури, пошук прототипів, збір та аналіз матеріалу, підготовка заявки).

6. Заявка № 2002075609 Україна, МПК 7 G01N33/00 від 08.07.2002 на “Спосіб прогнозування запліднення ооцитів при лікуванні безплідності в програмі запліднення in vitro”, рішення на видачу патенту від 28.08.2002.

7. Заявка № 2002075611 Україна, МПК 7 G01N33/00 від 08.07.2002 на “Спосіб прогнозування запліднення ооцитів при лікуванні безплідності в програмі запліднення in vitro”, рішення на видачу патенту від 28.08.2002.

8. Морально-этические проблемы вспомогательных репродуктивных технологий // Тези доповідей міжнародного симпозіуму ''Біоетика на порозі III тисячоліття". – Харків, – 2000. – С. 98 – 99 (співавт.: Грищенко В.И., Петрушко М.П., Пиняев В.И., Юрченко Г.Г.; огляд літератури, збір матеріалу).

9. Влияние активности антиоксидантных ферментов в фолликулярной жидкости человека на оплодотворение ооцитов и развитие эмбрионов при лечении бесплодия с использованием вспомогательных репродуктивных технологий // Збірник тез конференції молодих вчених “Медицина третього тисячоліття”. – Харків, – 2001. – Т. 3. - С. 48 (співавт.: Петрушко М.П., Піняєв В.И., Рязанцев В.В.; збір матеріалу, огляд літературних джерел, статистична обробка, підготовка до друку).

10. Оптимизация программы экстракорпорального оплодотворения путем использования биологически активных сред // Збірник наукових праць. Асоціація акушерів – гінекологів України. – К.: “Фенікс”, 2001. – С. 173 – 175 (співавт.: Грищенко В.И., Геродес А.Г., Петрушко М.П., Пиняев В.И.; огляд літературних джерел).

11. Влияние интенсивности перекисного окисления липидов в фолликулярной жидкости человека на развитие эмбрионов при лечении бесплодия методом экстракорпорального оплодотворения // Збірник тез конференції молодих вчених “Медицина третього тисячоліття”. – Харків, – 2002. - С. 113 (співавт.: Петрушко М.П., Піняєв В.И., Рязанцев В.В.; огляд літературних джерел, збір матеріалу та його аналіз, підготовка до друку).

12. Интенсивность процессов перекисного окисления липидов в фолликулярной жидкости в естественных менструальных циклах и в программе оплодотворения in vitro // Збірник наукових праць Асоціації акушерів - гінекологів України. – К.: “Інтермед”, 2002. – С. 163 – 165.