Анотація до роботи:

Хроменкова О.Б. Цитогенетичний аналіз ембріонів ссавців при дії різних факторів кріоконсервування. - Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата біологічних наук за спеціальністю 03.00.19 – кріобіологія. - Інститут проблем кріобіології і кріомедицини Національної академії наук України, Харків, 2003.

Дисертацію присвячено проблемі оцінки впливу факторів кріоконсервування (розчинів гліцерину, гіпотермії та заморожування з різними швидкостями) на рівень життєздатності, мітотичний режим та хромосомний набір 2-8-клітинних ембріонів миші.

Дроблення підвищує стійкість ембріонів до зниження температури. Експозиція у розчинах гліцерину не призводить до підвищення рівня анеуплоїдії в ембріонах різних стадій. Процедура швидкого заморожування, порівняно з повільним програмним заморожуванням, забезпечує більш високу збереженість бластомерів 8-клітинних ембріонів і не знижує рівень життєздатності.

Методами цитологічного і цитогенетичного аналізу встановлено, що кріоконсервування 8-клітинних ембріонів незалежно від методу заморожування і ступеня їх компактизації не впливає на рівень анеуплоїдії, але змінює спектр патологічних мітозів. Електронно-мікроскопічним дослідженням показано, що 8-клітинні ембріони після швидкого заморожування в основному характеризуються збереженістю ультраструктури ядра й основних органел цитоплазми бластомерів.

1. Визначення морфологічних і цитогенетичних параметрів ембріонів поряд з оцінкою рівня життєздатності на основних етапах циклу заморожування – відтавання є підставою прогнозування генетичної безпеки і ефективності методів кріоконсервування ембріонів ссавців. У дисертації проведено порівняння двох методів кріоконсервування ембріонів миші з використанням цитологічного та цитогенетичного аналізу для виявлення можливих морфологічних і генетичних порушень, які виникають під впливом чинників кріоконсервування.

2. Дроблення підвищує стійкість ембріонів до зниження температури. Експозиція 2- і 4-клітинних ембріонів у 1М розчині гліцерину при 0C, на відміну від експозиції при 22C, призводить до зниження рівня життєздатності в 1,2 рази, що супроводжується вірогідним зниженням мітотичного індексу в 1,3 рази і підвищенням рівня патологічних мітозів; експозицію 8-клітинних ембріонів у розчині гліцерину можна здійснювати як при 22C, так і при 0C.

3. На етапі додавання та видалення кріопротекторів у процедурі швидкого заморожування 2- і 4-клітинні ембріони, на відміну від 8-клітинних, мають морфологічні порушення у вигляді набрякання бластомерів, у зв’язку з чим використання швидкого заморожування для 2- і 4-клітинних ембріонів не є доцільним.

4. Експозиція у розчинах гліцерину не призводить до підвищення рівня анеуплоїдії у ембріонах різних стадій розвитку.

5. Швидке заморожування, порівняно з повільним, забезпечує більш високу збереженість бластомерів 8-клітинних ембріонів і не впливає на їх життєздатність, тоді як повільне заморожування викликає вірогідне зниження рівня життєздатності 8-клітинних компактизованих ембріонів в 1,25 рази.

6. Кріоконсервування, незалежно від методу заморожування і ступеня компактизації 8-клітинних ембріонів, не змінюючи рівень анеуплоїдії, призводить до зміни спектра патологій мітозу; повільне програмне заморожування, на відміну від швидкого, призводить до вірогідного підвищення в 3 рази рівня патологічних мітозів у 8-клітинних компактизованих ембріонах.

7. Ультраструктурний аналіз 8-клітинних ембріонів миші, які зберігають морфологічну цілісність після швидкого заморожування, виявив наявність нелетальних ушкоджень мембранних структур бластомерів.

8. На підставі результатів вивчення збереженості ембріонів за даними світлової й електронної мікроскопії, мітотичного режиму, вивчення хромосомного набору бластомерів, можна заключити, що при кріоконсервуванні 8-клітинних ембріонів перевагу слід віддавати процедурі швидкого заморожування; застосовувати повільне заморожування доцільно тільки для кріоконсервування 8-клітинних ранніх ембріонів.

Публікації автора:

1. Хроменкова О.Б., Смольянинова Е.И., Ханина Л.А. Осмотическое поведение эмбрионов мыши в растворах глицерина и его оксиэтилированного производного // Проблемы криобиологии. - 1999. - №4. - С. 77-78. (дисертантом проведено вивчення осмотичної поведінки 2-клітинних ембріонів і виконаний розрахунок зміни площі перерізу бластомерів у розчинах гліцерину).

2. Смольянинова Е.И., Жегунов Г.Ф., Хроменкова О.Б. Осмотическое поведение эмбрионов мыши в гипертонических растворах 1,2-пропандиола и его оксиэтилированных производных // Проблемы криобиологии. - 2000. - №1. - С. 49-51. (дисертант провела вибірку літератури з проблеми використання різних кріопротекторів і режимів заморожування ембріонів, виконала отримання і оцінку ембріонів і розрахунок зміни площі перерізу бластомерів у кріозахисних розчинах).

3. Грищенко В.І., Жегунов Г.Ф., Петрушко М.П., Хроменкова О.Б. Причини низької ефективності програми ЗІВ: цитогенетичний аспект // Педіатрія, акушерство та гінекологія. - 2000. - № 2. - С. 107-110. (дисертантом проведено вибірку вітчизняної та закордонної літератури з проблеми ефективності програм запліднення in vitro і систематизацію даних щодо результатів цитогенетичного аналізу).

4. Смольянинова Е.И., Хроменкова О.Б., Жерноклев Г.В. Влияние различных этапов криоконсервирования методом сверхбыстрого замораживания на осмотическую устойчивость и морфофункциональную сохранность эмбрионов мыши // Проблемы криобиологии. - 2001. - №2. - С. 49-55. (дисертантом вивчено вплив прямого занурення у рідкий азот на рівень життєздатності і мітотичний режим ембріонів).

5. Хроменкова О.Б. Цитогенетические нарушения в доимплантационных эмбрионах мыши после криоконсервирования // Вісник проблем біології і медицини. - 2001. - № 3. - С. 35-39.

6. Хроменкова О.Б., Жегунов Г.Ф. Мітотичний індекс ембріонів миші після обробки гліцерином // Буковинський медичний вісник. - 2002. -Т. 6, №3-4. - С. 197-199. (дисертантом досліджено вплив 1М розчину гліцерину на мітотичну активність та рівень життєздатності 2-8-клітинних ембріонів в умовах in vitro).

7. Khromenkova O.B., Zhernoklev G.V., Zhegunov G.F., Grischenko V.I. The incidence of mitotic abnormalities in cryopreserved eight-cell early and compacted mouse embryos // CryoLetters.-2003.-Vol.24, №1-2.-P.27-32. (дисертантом вивчено вплив двох методів кріоконсервування на рівень життєздатності в умовах in vitro та на цитогенетичні характеристики 8-клітинних ембріонів миші – кількість пікнотично змінених ядер, рівень патологічних мітозів, співвідношення різних типів патологій мітозу).

8. Хроменкова О.Б., Жерноклев Г.В. Необходимость использования животной модели в программе искусственного воспроизводства // Тези доповідей міжнар. симп. “Біоетика на порозі III тисячоліття”. - Харків, 2000.- С. 121-122. (дисертантом проведено експерименти з кріоконсервування і цитологічний аналіз ембріонів миші).

9. Хроменкова О.Б., Жегунов Г.Ф., Жерноклев Г.В. Нарушения митотического режима в эмбрионах мыши после криоконсервирования // Проблемы криобиологии. - 2001. - №3. - С. 65-66. (дисертантом виконано консервування ембріонів з використанням методу повільного програмного заморожування, цитогенетичними методами досліджено його вплив на мітотичний режим ембріонів).

10. Хроменкова О.Б., Жерноклев Г.В. Цитологический анализ эмбрионов мыши после эквилибрации // Сб. тез. 5-й Пущинской конф. молодых ученых “Биология – наука 21-го века”.– Пущино, 2001. - С. 97. (дисертантом вивчено вплив експозиції у розчині гліцерину при різних температурах на рівень патологій мітозу в ембріонах миші).

11. Khromenkova O.B., Zhernoklev G.V., Antonenko T.S., Zhegunov G.F. Effect of cryopreservation on morphological features and chromosomal set of mouse embryos // Ab. 38th Annual Meeting of Society for Cryobiology. - Edinburgh (UK), 2001. - P. 82. (дисертантом досліджено рівень патологій мітозу методами цитологічного аналізу і рівень життєздатності ембріонів миші методом культивування після повільного заморожування).

12. Смольянінова Є.І., Хроменкова О.Б., Жернокльов Г.В., Коваленко І.Ф. Вплив умов еквілібрації на морфофункціональні параметри 8-клітинних ембріонів миші // Тези доповідей III з’їзду Українського біофізичного товариства з міжнародною участю. – Львів, 2002. - С. 141. (дисертантом досліджено вплив тривалості експозиції 8-клітинних ембріонів миші у кріозахисному розчині на рівень життєздатності в умовах in vitro).

13. Хроменкова О.Б. Изучение стабильности веретена деления в эмбрионах мыши после криовоздействия // Тези доповідей межвуз. конф. молодих учених “Медицина третього тисячоліття” – Харків, 2003. - С. 42-43.