Библиотека диссертаций Украины Полная информационная поддержка
по диссертациям Украины
  Подробная информация Каталог диссертаций Авторам Отзывы
Служба поддержки




Я ищу:
Головна / Біологічні науки / Цитологія, клітинна біологія, гістологія


Кащак Наталія Іванівна. Механізми взаємодії мишачих макрофагоподібних клітин лінії J774.2 з клітинами-мішенями : дис... канд. біол. наук: 03.00.11 / НАН України; Інститут біології клітини. — Л., 2007. — 137арк. — Бібліогр.: арк. 113-135.



Анотація до роботи:

Кащак Н.І. Механізми взаємодії мишачих макрофагоподібних клітин лінії J774.2 з клітинами-мішенями. – Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата біологічних наук за спеціальністю 03.00.11 – цитологія, клітинна біологія, гістологія. – Інститут біології клітини НАН України, Львів, 2007.

Дисертація присвячена вивченню механізмів взаємодії макрофагів лінії J774.2 з клітинами-мішенями різного походження.

Показано цитотоксичну дію макрофагів лінії J774.2 щодо трансформованих фібробластів лінії L929, що проявляється в транслокації фосфатидилсерину на зовнішній бік плазматичної мембрани, падінні мітохондріального потенціалу, фрагментації ДНК, активації каспаз -3, -7, -8, -9.

Нормальні мишачі фібробласти NIH 3T3 нечутливі до дії макрофагів і блокують цитотоксичний ефект останніх щодо фібробластів лінії L929.

За допомогою ДНК-матриць та методу електрофоретичного аналізу ампліфікованих продуктів реакції зворотної транскрипції досліджено експресію генів цитокінів та генів, пов’язаних із трансдукцією сигналів у клітині. Виявлено зміни рівня мРНК інтерлейкіну-1, p105-попередника транскрипційного фактора NF-B, GADD45, транскрипту, що індукується у відповідь на пошкодження ДНК та зупинку клітинного циклу, та зниження рівня мРНК інгібіторного білка IB, що зв’язуються з NF-B, та антигена CD5 у макрофагів лінії J774.2, виділених з кокультури з трансформованими фібробластами ліні L929, порівняно з макрофагами, культивованими окремо, а також з нормальними мишачими фібробластами лінії NIH 3T3 та з обома типами клітин-мішеней одночасно.

У макрофагів, культивованих з клітинами-мішенями, чутливими до їх цитотоксичної дії виявлено зростання ДНК-зв'язувальної активності транскрипційного фактора NF-kB.

У дисертаційній роботі проведено дослідження взаємодії макрофагів лінії J774.2 з клітинами-мішенями різного походження. Показано інгібувальний вплив нечутливих клітин-мішеней на цитотоксичну дію макрофагів. Досліджено експресію генів у макрофагів, ізольованих із кокультури з клітинами-мішенями, чутливими та нечутливими до їх цитотоксичної дії.

  1. Показано цитотоксичну дію макрофагів лінії J774.2 щодо трансформованих фібробластів лінії L929, що проявляється в транслокації фосфатидилсерину на зовнішній бік плазматичної мембрани, падінні мітохондріального потенціалу, фрагментації ДНК, активації каспаз -3, -7, -8, -9.

  2. Виявлено інгібувальний вплив нормальних мишачих фібробластів NIH 3T3 на цитотоксичну дію мишачих макрофагоподібних клітин лінії J774.2 щодо трансформованих мишачих фібробластів лінії L929.

  3. Встановлено, що цитотоксична дія макрофагів щодо клітин лінії L929 індукується при безпосередньому контакті клітин-мішеней та ефекторів, а реалізується цитотоксичний ефект через розчинні медіатори та при безпосередньому контакті клітин.

  4. Показано, що макрофаги лінії J774.2 індукують апоптоз у трансформованих мишачих фібробластів лінії L929 за рецептор-залежним механізмом, що призводить до активації каспази-8.

  5. Виявлено індукцію експресії мРНК інтерлейкіну-1 в макрофагах, виділених з кокультур з клітинами-мішенями, причому в макрофагів, культивованих з клітинами лінії L929, рівень мРНК інтерлейкіну-1 був у 2 рази вищий, ніж у макрофагів, культивованих з клітинами лінії NIH 3T3, і у 2,6 раза вищий, ніж при культивуванні з двома типами клітин-мішеней одночасно.

  6. Рівень мРНК р105, попередника транскрипційного фактора NF-B, зростав у 2,6 раза порівняно з контролем у макрофагах, культивованих з L929 фібробластами, в 1,6 раза при культивуванні з NIH 3T3 фібробластами і практично не змінювався в макрофагах, культивованих з обома типами клітин-мішеней. Рівень мРНК -ланцюга IB зростав у макрофагів у кокультурі з клітинами лінії NIH 3T3 (в 4,4 раза порівняно з контролем) і в кокультурі з обома мішенями (в 2,3 раза) та практично не виявлявся в макрофагів, культивованих з клітинами лінії L929.

  7. Показано зростання рівня мРНК GADD45 у макрофагах, культивованих з L929 фібробластами, в 11 разів порівняно з контролем. Рівень мРНК цього гена практично не змінювався в макрофагах, культивованих з NIH 3T3 фібробластами та з двома типами клітин-мішеней. У макрофагів лінії J774.2 при культивуванні з фібробластами лінії L929 у 6 разів порівняно з контролем знижувався рівень мРНК СD5-антигена, який практично не змінювався в інших варіантах кокультур.

Зміни в експресії вищезгаданих генів, які виявлялися методом ДНК-
матриць, були підтверджені й за допомогою зворотної транскрипції та полімеразної
ланцюгової реакції з наступним електрофоретичним аналізом продуктів.

  1. У макрофагів, культивованих з клітинами-мішенями, чутливими до їх цитотоксичної дії, зростає ДНК-зв'язувальна активність транскрипційного фактора NF-kB.

Публікації автора:

  1. Кащак Н.І., Ключівська О.Ю., Стойка Р.С. Індукція лектинами омели цитотоксичності у макрофагів щодо пухлинних клітин // Експер. клін. фізіол. біохім. – 2001. – No 1. – C. 22-24. (Дисертант провела експериментальні дослідження, проаналізувала результати та літературні дані, брала участь в оформленні результатів та написанні статті)

  2. In vitro response of phagocytic cells to immunomodulating agents // Med. Sci. Monit. – 2001. – Vol. 7, No 4. – P. 652-658. (Дисертант провела дослідження впливу імуномодулюючих агентів на активність NO-синтази в макрофагів лінії J774.2, провела пошук та аналіз даних літератури, брала участь в аналізі результатів та написанні статті).

  3. In vitro studies of activation of phagocytic cells by bioactive peptides // J. Physiol. Pharmacol. – 2002. – Vol. 53, No 4. – P. 675-688. (Дисертант провела дослідження впливу біологічно активних пептидів на продукцію нітрит-іонів макрофагами лінії J774.2, провела пошук та аналіз даних літератури, брала участь в аналізі результатів та написанні статті).

  4. Bystander effect of normal fibroblasts for macrophages co-cultured with susceptible transformed target cells // Cell Biol. Int. – 2005. – Vol. 29, No 1. – P. 41-50. (Дисертант провела експериментальні дослідження та їх статистичну обробку, проаналізувала результати та літературні дані, оформила результати досліджень та брала участь у написанні статті )

  5. Кащак Н.І., Стойка Р.С. Дослідження міжклітинних взаємодій у змішаних культурах макрофагів лінії J774.2 та фібробластів ліній L929 та NIH3T3: оцінка життєздатності клітин in situ за допомогою флуоресцентної мікроскопії // Вісник Львівського університету. Серія біологічна. – 2007. – Т. 43. – С. 106-110. (Дисертант провела експериментальні дослідження та їх статистичну обробку, проаналізувала результати та дані літератури, підготувала статтю до друку).

  6. Кащак Н.І., Стойка Р.С. ДНК-зв'язувальна активність транскрипційного фактора NF-kB у макрофагів лінії J774.2, культивованих з клітинами-мішенями, чутливими та нечутливими до їх цитотоксичної дії // Клін. експ. патол. – 2007. – Т. 6, No 1. – С. 143-145. (Дисертант провела експериментальні дослідження та їх статистичну обробку, проаналізувала результати та літературні дані, підготувала статтю до друку).

  7. Kashchak N., Klyuchivska O. Induction of macrophage cytotoxicity against tumour cells by mistletoe lectins // Proc. of conf. “The macrophage 2000. Mononuclear phagocytes in basic and clinical immunology”. – Krakow, Poland – 21-22 september, 2000. – C. 43.

  8. Kashchak N., Klyuchivska O., Stoika R. Mistletoe lectins and bacterial lipopolisaсcharides induce cytotoxic action of macrophages towards co-cultured tumour cells // Proc. of 3rd Parnas Conf. Mechanisms of cellular signal transduction and communication. – Lviv. – 14-16 October, 2000. – P. 140.

  9. Kashchak N., Tsaryk R., Stoika R. Effect of bystander cells on the expression of genes coding for cytokines and signal transduction elements in macrophages co-cultured with susceptible transformed target cells // Матеріали Установчого з’їзду Українського товариства клітинної біології. – Львів. – 25-28 квітня, 2004. – С. 357.

  10. Stoika R.S., Kashchak N.I. Approaches for study of macrophage-target cell interactions // Proc. of 29th FEBS Meeting. – Warsaw. – 26 June-1 July, 2004. – P. 83.

  11. Стойка Р.С., Кащак Н.І. Вплив фібробластів на цитотоксичну дію макрофагів щодо трансформованих клітин: цитоморфологічне і молекулярно-біологічне дослідження // Матеріали науково-практичної конференції “Гістологія на сучасному етапі розвитку науки”, Тернопіль. – 12-13 жовтня, 2004. – C. 64.

  12. Kashchak N.I., Tsaryk R.V. Bystander effect of normal fibroblasts for macrophages co-cultured with susceptible transformed target cells // Матеріали ІХ Українського біохімічного з’їзду. – Харків. – 24-27 жовтня, – 2006. – C. 63.