Анотація до роботи:

Денисова О.М. Кріочутливість еритроцитів різних видів ссавців. – Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата біологічних наук за фахом 03.00.19 – кріобіологія. – Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України, Харків, 2006.

Дисертаційна робота присвячена вивченню чутливості еритроцитів різних видів ссавців (кінь, бик і собака) до кріоконсервування під захистом кріопротекторів і оцінці структурно-функціонального стану деконсервованих клітин.

Одержані в роботі результаті свідчать про те, що найбільш ефективним кріопротектором в процесі кріоконсервування для еритроцитів коня, бика і собаки є ДМСО. ПЕО-1500 здатний зберігати клітини в процесі заморожування-відігрівання, проте після перенесення таких деконсервованих клітин до фізіологічних умов вони ушкоджуються. Після кріоконсервування з 10 %-м ДМСО, на відміну від 15 %-го ПЕО-1500, клітини зберігають морфологічні показники. Після заморожування-відігріву клітин з ПЕО-1500 та ДМСО концентрації АТФ і 2,3-ДФГ зберігаються на рівні контролю. Дослідження білків мембрани еритроцитів всіх видів тварин методом електрофорезу в ПААГ з використанням діаміду показало порушення їх просторового розташування. Модифікація мембранно-цитоскелетного комплексу виявляється у більшій мірі для еритроцитів, кріоконсервованих під захистом ПЕО-1500.

Механізми кріочутливості еритроцитів людини достатньо вивчено та розроблено ефективні методи їх кріоконсервування, однак для еритроцитів тварин цей напрямок дослідження залишається досить актуальним. У дисертаційній роботі представлено теоретичне узагальнення наукової проблеми щодо порівняльного вивчення чутливості еритроцитів ссавців до кріоконсервування у присутності кріопротекторів проникаючого і непроникаючого типів, а також розробки підходів, спрямованих на зменшення пошкодження клітин в процесі кріоконсервування.

1. Встановлено, що гліцерин не здатний забезпечити захист еритроцитів досліджених тварин при низькотемпературному консервуванні. Високе збереження клітин досягається при використанні ДМСО і ПЕО-1500. Еритроцити, кріоконсервовані з ДМСО, порівняно з ПЕО-1500 проявляють високу стійкість (на рівні контролю) в моделі трансфузії з підтримкою нормальної осмотичної крихкості.

2. Коефіцієнт проникності мембран еритроцитів коня, бика та собаки для гліцерину значно нижчий, ніж для ДМСО .

3. Найбільш стійкими до процесу кріоконсервування у присутності кріопротекторів різного механізму дії є еритроцити собаки, найменш стійкими – еритроцити коня.

4. Виявлено морфологічні зміни клітин при кріоконсервуванні в присутності кріопротекторів. У випадку ДМСО після заморожування-відігрівання та видалення з клітин кріопротектора спостерігається ехіноцитоз, а після перенесення деконсервованих еритроцитів до аутоплазми відновлюється їх початкова форма. При кріоконсервуванні еритроцитів з ПЕО-1500 спостерігається стоматоцитоподібна трансформація, яка зберігається і після повернення клітин до фізіологічних умов.

5. При кріоконсервуванні еритроцитів ссавців з ДМСО і ПЕО-1500 вміст АТФ і 2,3-ДФГ зберігається на рівні контролю. При моделюванні трансфузії концентрації цих макроергів в еритроцитах, кріоконсервованих у присутності ПЕО-1500, достовірно знижується в процесі інкубації, що не характерно для контрольних і кріоконсервованих з ДМСО клітинами.

6. Кріоконсервування еритроцитів у присутності ПЕО-1500 і ДМСО призводить до модифікації білкового спектру мембран, яка виявляється методом електрофорезу із застосуванням діаміду. При кріоконсервуванні з ПЕО-1500 модифікація мембранно-цитоскелетеного комплексу більш виражена.

Публікації автора:

1. Денисова О.Н., Кулешова Л.Г., Землянских Н.Г., Жегунов Г.Ф. Трансформация эритроцитов животных после криоконсервирования // Вісник проблем біології і медицини. – 2005. – Вип.4. – С. 41-45.

2. Денисова О.Н., Жегунов Г. Ф., Бабийчук Л. А. Криоконсервирование эритроцитов животных под защитой диметилсульфоксида, полиэтиленгликоля, глицерина // Проблемы криобиологии. – 2005. – №2. – С. 195-201.

3. Жегунов Г.Ф., Денисова О.Н., Землянских Н.Г. Криоконсервирование и сохранность эритроцитов животных // Проблемы криобиологии. – 2005. – Т.3. – №3. – С. 566 – 569.

4. Денисова О.Н. Исследование уровня 2,3-ДФГ и АТФ в эритроцитах животных после низкотемпературного консервирования под защитой диметилсульфоксида и полиэтиленоксида м.м. 1500 // Вісник проблем біології і медицини. – 2005. – Вип.3. – С. 33-38.

5. Денисова О.М., Жегунов Г.Ф., Бабійчук Л.О. Кріоконсервування еритроцитів тварин під захистом поліетиленоксида // Біологія тварин. – 2004. – Т.6. – №1-2. – С.107-110.

6. Жегунов Г.Ф., Денисова О.Н. Резистентность эритроцитов домашних животных к криоконсервированию // Ветеринарна медицина. – 2005. – Т.1. – С. 433-434.

7. Денисова О.М. Стійкість еритроцитів коня, бика, собаки до кріоконсервування: Тези доповідей 1 Міжнародної конференції студентів та аспірантів „Молодь та поступ в біології.” – Львів, 2005. – С.13.

8. Денисова О.Н. Вивчення ефекту диметилсульфоксиду та поліетиленгліколя при кріоконсервуванні еритроцитів бика, коня: Тези конференції-конкурсу робіт молодих учених, присвяченої 100-річчю від Дня народження М.Ф. Гулого. – Київ, 2005. - С. 12.

9. Денисова О.Н., Землянских Н.Г., Жегунов Г.Ф. Структурные изменения мембран эритроцитов животных при криоконсервировании под защитой ПЭО-1500: Матеріали Міжнародної науково-практичної конференції „Дні науки 2005”. – Дніпропетровськ: Наука і освіта, 2005. – Т.2. „Біологія.” – С. 17-18.