Анотація до роботи:

Черняєв С.А.Гетерогенність популяції представників роду Аегососсиs і її роль у клініці і розробці нових пробіотиків. Дисертація на здобуття вченого ступеня кандидата медичних наук за спеціальністю 03.00.07-Мікробіологія.-Інститут мікробіології та імунології ім. І.І.Мечникова АМН України.- Харків, 2002.

Дисертація присвячена дослідженню морфологічної, фізіологічної і біохімічної гетеротрофності аерококів, які представляють основу А-бактерину: розробці нових пробіотиків і методів контролю їх автентичності. Показані відмінності культур аерококів, що мають різне походження, за біохімічними властивостями.

Встановлена наявність у популяції аерококів "Н₂0₂ ^–“ мутантів аерококів, не описаних раніше, що мають складні морфологічні зміни, пов'язані з підвищеною продукцією метилгліоксалю. Визначений механізм продукції аерококами водню пероксиду, який полягає в поєднанні лактатоксидазної, a-гліцерофосфатоксидазної і супероксиддисмутазноі активності, що обумовлює утворення супероксидного аніону і його дисмутацію; виявлено метаболічний шлях продукції молочної кислоти аерококами через утворення метилгліоксалю. Визначено декілька біотипів аерококів у залежності від оксидазної або редуктазної активності клонів.

Вперше виявлені стабільні морфофункціональні мутанти аерококів, які дають гетерогенні ревертанти з різними морфологічними, біохімічними і фізіологічними ознаками.

Отримані результати відкривають перспективу досліджень, пов'язаних з розв'язанням питань щодо ролі аерококів у мікробіоценозах і їх вплив на біологічні процеси в місцях колонізації на слизових оболонках.

Селекціоновані два штами аерококів: № 167 (полірезистентний до антибіотиків варіант) і № 308 - неактивний "Н₂0₂ ^–“ - мутант, призначений для отримання високоактивних клонів аерококів у процесі реверсії або при генетичній трансформації. Розроблені селективно-індикаторні середовища для аерококів, що дозволяють виділити аерококи з контамінованих іншими бактеріями матеріалів, диференціювати їх за біохімічною активністю, дослідити їх біохімічну гетерогенність.

Підібрано хіміотерапевтичний комплекс з фармакопейних препаратів "грамурин-етоній", високоантагоністично активний відносно умовно-патогенних і патогенних бактерій,

неінгібуючий ріст і розмноження аерококів, що створює селективні умови для аерококів.

Розроблений високочутливий лактатоксидазний сенсор для визначення молочної кислоти на базі культур аерококів з підвищеною лактатоксидазною активністю.

Удосконалена раціональна схема встановлення автентичності А-бактерину для введення в ФС і ПР виробництва препарату.

1. Охарактеризована гетерогенність мікроорганізмів роду Аеrососсиs, вилучених з різних джерел, з врахуванням спонтанної і індукованої мінливості, селекціоновані клони аєрококів із завданими біологічними властивостями.

2. Встановлено, що повна втрата лактатоксидазної активності у "Н₂0₂ ^–“ мутантів аерококів пов'язана з втратою антагоністичної активності "in vitro" і морфологічними змінами клітин в результаті порушення розподілу клітин, що цілком ймовірно пов’язано з накопиченням метилгліоксалю. Відновлення лактатоксидазної активності у ревертантів аерококу супроводиться відновленням початкової морфології клітин і посиленням синтезу водню пероксиду і антагоністично активної пептидної фракції у частини клонів ревертантів.

3. Селекціоновано штами аерококів: полірезистентий до антибіотиків варіант Aerococcus viridans 167 VR, що використовується для приготування бактерійного препарату, і "Н₂0₂ ^–“ мутант аерококу № 308, призначений для біохімічних і генетичних досліджень, а також для отримання високоактивних клонів аерококів.

4. Розроблені селективно-індикаторні середовища для виділення аерококів з контамінованих іншими бактеріями матеріалів і для оцінки їх біохімічних властивостей: СІС-1 - середовище невизначеного біохімічного складу; СІС-2 - середовище певного біохімічного складу, що не містить субстрат окислення; СІС-3 - середовище певного біохімічного складу, що містить специфічний субстрат окислення і протектор клітин. Показана внутрішньовидова диференціація культур аерококів при рості на СІС-1 і СїС-2 по ступеню вираженості біохімічних властивостей.

5. Вдосконалені етапи отримання пробіотичного препарату, в результаті чого в два рази посилена антагоністична активність безклітинного компонента "А-бактерину" за рахунок стимуляції продукції водню пероксиду DL-треоніном, у 16 разів посилений синтез антагоністично активного пептиду додаванням глюкози до середовища вирощування, на 8,8 - 11,5% підвищене виживання клітин аерококів при введенні в середовище висушування лізату Deinococcus radiodurans.

6. Розроблений лактатоксидазний сенсор на базі імобілізованих клітин аерококів, чутливий до D- і L- ізомерів молочної кислоти з пороговою чутливістю 0,1 - 1,0 мМ лактату у зразках, що досліджуються.

Публікації автора:

1. Кременчуцький Г.М., Горбунова М.Л., Юргель Л.Г., Чуйко В.І., Черняєв С.А. Біологічні властивості аерококів-антагоністів -представників мікробіоценозів людини.// Мікробіол.журн. -1994. Т 56, N4, С.36-42

2. Риженко С.А., Черняєв С.А., Кременчуцький С.Г. Зміна біологічних властивостей усередені популяції Aerococcus viridans//Медичні перспективи.-2002.-Т.2.-№2.-С.18-21

3. Кременчуцький Г.М., Юргель Л.Г., Черняєв С.А., Кутовий А.Б. Інгібітори протео-літичних ферментів аерококового походження // Мікробіол.ж.-1994. -Т.56, №2.-С.75

4. Риженко С.А., Кременчуцький С.Г., Черняєв С.А., Кулішенко С.Г. Біологічні властивості А-бактерину // Вісник СумДУ.-2001.-№11(32).-С159-1б9.

5. Кременчуцький Г.М., Черняєв С.А., Риженко С.А., т.ін. Розробка селективно-індикаторних середовищ визначеного біохімічного складу для дослідження фізіологічних властивостей Аегососсиs viridans // Тези доп. "Розвиток санітарної мікробіології в Україні" - Чернівці,2002.-С.61-66

6. Черняєв С.А., Кременчуцкий С.Г., Кошевая И.П., Мединская О.Н. Ферменты аэрококков, обеспечивающие биологическую активность аэрококков // Международная научно-практическая конференция «Новые технологии получения и применения биологически активных веществ».- Алушта, 2002. - С. 102 – 103.

7. Кременчуцкий Г.Н., Черняев С.А., Юргель Л.Г., Кулишенко С.Г. Биологически активные вещества аэрококков. Международная научно-практической конференция «Новые технологии получения и применения биологически активных веществ».-Алушта, 2002.-С.

8. Роль аэрококков в биохимических поцессах макроорганизма /Кременчуцкий Г.Н., Юргель Л.Г., Черняев С.А. и др. // Актуальные вопросы микробиологии, эпидемиологии и иммунологии инфекционных болезней: Тез. докл. науч.-практ. конф.- Харьков,1993.- Вип.4- Часть1.-С.198

Методичні рекомендації, затверджені МОЗ України:

9. Лабораторна діагностика та діагностичні критерії змішаних гострих кишкових інфекцій “.- Харків, 2000.-52 c. (у співавторстві).

10. Мікробіологічна діагностика рахнельозів (захворювань, спричинених Rachnella aquatilis).- Харків, 1997.- 22 с.